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十八烷基硅烷鍵合硅膠柱的色譜方法淺述News
十八烷基硅烷鍵合硅膠柱的色譜方法淺述
更新時(shí)間:2017-11-24 點(diǎn)擊次數(shù):7327次
  十八烷基硅烷鍵合硅膠柱的色譜方法:
  1.稱量。200-300目硅膠,稱30-70倍于上樣量;如果極難分,也可以用100倍量的硅膠。
  2.攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢?。如果洗脫劑是石油?乙酸乙酯/丙酮體系,就用石油醚拌;如果洗脫劑是氯仿/醇體系,就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿,說明溶劑中含水量太大,尤其是乙酸乙酯/丙酮,如果不與水配伍走分配色譜的話,必須預(yù)先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥,以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感,不能用氯仿體系過柱。
  3.裝柱。將柱底用棉花塞緊,不*海沙,加入約1/3體積石油醚(氯仿),裝上蓄液球,打開柱下活塞,將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降,會(huì)有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi),用石油醚(氯仿)將其沖入柱中。
  4.壓實(shí)。沉降完成后,加入更多的石油醚,用雙聯(lián)球或氣泵加壓,直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱,都應(yīng)進(jìn)行這一步,可使分離度提高很多,且可以避免過柱時(shí)由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂。
  5.上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后,加入一些洗脫劑,再將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑,而不會(huì)沖壞硅膠表面。
  6.過柱和收集。十八烷基硅烷鍵合硅膠柱的柱層析實(shí)際上是在擴(kuò)散和分離之間的權(quán)衡。太低的洗脫強(qiáng)度并不好,推薦用梯度洗脫。
  7.檢測。要更多地使用噴顯劑,如果僅用紫外燈,會(huì)損失較多產(chǎn)品,紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。
  8.送譜。收集的產(chǎn)品旋干,在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或?yàn)橐后w,可過一小凝膠柱,作為送譜前的zui后純化手段。可除去氫譜左右的“硅膠”峰。

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